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                    植物組織類樣本DNA提取完整解決方案

                    更新日期:2019年11月28日 大字 小字



                    植物DNA的提取和純化是植物基因工程研究的基礎操作。實施分子標記、基因圖譜、基因指紋圖譜、基因文庫構建、遺傳多態性分析、DNA重組、RAPD(隨機引物多態性DNA)、RFLP(限制性酶多態性)、基因分離及遺傳轉化和鑒定等都以提取DNA為前提。



                    目前,對從植物組織中提取DNA方法的要求是:簡便、有效、快捷以及經濟。與動物組織相比,植物組織含有較多的多糖和其他次生代謝產物(酚、酯、萜、色素等),這給高質量的DNA提取帶來較多的困難。尤其是多糖成分是影響DNA純度最常見的問題。如何做到既去除這些污染物又能相對保持高的產量,并且能簡捷有效地提純,一直是植物生物技術研究者探索的問題。


                    01

                    普通的植物

                    對于普通的植物(低酚、低酯、低糖等)如:水稻、白菜、莧菜、南瓜、黃瓜、西紅柿、上海青、菠菜、筍瓜、冬瓜、蓮藕、山藥、竹筍等;我們可以選用普通植物DNA提取試劑盒(磁珠法)試劑(貨號:K318)。


                    02

                    多糖、多酚類植物

                    對于多糖、多酚類植物(香蕉、西瓜、蘋果、梨等果肉,紅薯、馬鈴薯等塊莖,棉花、月季、枇杷、益母草、夏枯草等人參、曼陀羅、向天果、射干、桔梗、滿山紅、金雞納霜等藥用植物)可以選用多酚植物DNA提取試劑盒(磁珠法)試劑(貨號K319),針對類似的植物我們經過長期的優化,可以得到較好的實驗結果。


                    以葉片為例,葉片需先剪碎成小塊,以便放入1.5ml離心管。最佳樣本的長度應在1cm 以下。重量不超過250mg,推薦使用50mg,如果是植物種子粉末可以使用10mg-20mg粉末即可。


                    葉子


                    樣本數量較少的情況下:可以使用手持式(寶予德)研磨儀,將植物的組織切碎后放入1.5ml 尖底離心管中,將研磨棒的頭部碾壓植物組織,打開研磨儀的開關,直至肉眼看到植物組織研磨成碎末。




                    樣本數量較多的情況下:可以使用HF Extract組織研磨儀 可以同時處理2-192個樣品(需配不同適配器)。將植物的組織切碎后放入2ml的研磨管中,加入鋼珠或二氧化鋯珠8-16顆(根據試劑情況靈活選擇),按照如下方案編輯研磨程序:




                    對于莖部纖維化比較嚴重的組織或者根部樣本,要配合液氮處理(將植物組織用剪刀剪切<0.5cm,放入研磨管中),使用配套的冷凍研磨套件(如下圖),將研磨罐中灌入液氮冷凍植物樣品,等液氮揮發后,快速擰好研磨罐放入研磨儀。執行程序:




                    提取過程:
                    1

                    打開研磨后的管子(預先6000rpm離心30sec防止管子上的碎片或碎末飛出,污染實驗室),加入裂解液APL(需要預熱)400-600 μl,放入水浴鍋中孵育30 min-1 h。


                    2

                    孵育后,12000 rpm 離心3min,取上清100μl-200μl 上清(含淀粉多的樣品容易糊化,可以增加離心時間至5-10min)


                    96孔預分裝板


                    3

                    加入預分裝96孔板中的第1、7列,然后放入核酸提取儀中(如下圖),插好磁棒套。點擊運行程序。



                    4

                    20min后,完成DNA的提取。轉移5、11列中的DNA 至1.5ml離心管中,使用超微量分光度計(Mcro-Drop )檢測核酸濃度:



                    5

                    記錄檢測結果,進入下步擴增或將DNA保存至-20℃。




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